宠物行业市场迅速扩张，前景一片大好，但是相关法律法规和行业规范却相对滞后。网络搜索“宠物行业规范”出来的第一个词条是“宠物行业规范一片空白”，其次是“宠物行业规范化标准化”等等。其实国家相关部门早在2012年就《动物诊疗机构技术管理规范》及《兽医诊疗人员行为规范》起草工作召开了研讨会，提出技术和行为方面的规范和指导尚存在不足。之后中国兽医协会陆续出台了宠物诊疗相关技术规范，加强兽医诊疗的行为规范，促进宠物诊疗行业健康快速发展。
每年这个季节又到了宠物皮肤病的高发期，根据中国兽医协会在2022年10月26日发布实施的《猫皮肤癣菌病诊断技术规范》，整理出诊断判定的流程及实验室相关操作的方法，供各位兽医朋友参考学习。
皮肤癣菌病（dermatophytosis）
主要由犬小孢子菌、石膏样小孢子菌或须毛癣菌引起的动物角化组织的感染。
注：动物角化组织如爪、毛发和角质层等。
猫皮肤癣菌病诊断结果判定流程
摘自《猫皮肤癣菌病诊断技术规范》
临床表现
患猫常见以下临床症状：
——面部、耳部、爪部等出现一个或多个形状不规则或环状脱毛区域，毛发常出现断裂。病变伴或
不伴有鳞屑，皮肤可出现红斑、丘疹、结痂等。
——少数情况下，患猫可出现粟粒状皮炎并伴发瘙痒。
——甲部可出现单个或多发的甲沟炎。
——猫可发生结节性皮肤癣菌病，表现为单个或多个脱毛或者渗出性圆形结节或肿块。
实验室检查
伍德氏灯检查及操作规范
A.1原理
传统伍德氏灯可发出波长在320 nm~400 nm的紫外光，而新型LED伍德氏灯含有一组紫外LED（波长为365 nm）。在伍德氏灯的照射下，某些皮肤癣菌感染的毛干可观察到典型的苹果绿色荧光，其荧光来源于被感染毛发的水溶性化学代谢物。
A.2准备材料
传统伍德氏灯或新型LED伍德氏灯。
A.3检查方法
将患猫带入暗室，将传统伍德氏灯接通电源，预热10 min后，按下开关数秒后灯即亮。新型LED伍德氏灯无需预热。将伍德氏灯灯光对准病变处，检查疑似皮肤癣菌感染的部位，观察有无苹果绿色荧光产生。
A.4结果判读
若观察到感染部位的毛干上出现苹果绿色荧光，则伍德氏灯检查结果为阳性，否则，为阴性结果。
A.5注意事项
进行伍德氏灯检查时应注意：
——在检查之前，应用毛刷将全身毛发表面的微粒清洁干净。
——清洁伍德氏灯的防护罩和反光板确保最大光度输出。
——开始检查前，传统伍德氏灯应预热10 min，而新型LED伍德氏灯无需预热。
——伍德氏灯距离患病动物皮肤表面2 cm～4 cm。
皮肤检查及操作规范
在皮肤病健交界处拔毛、刮皮或对肿物或结节穿刺进行真菌学检查，在显微镜下观察寻找真菌菌丝或真菌孢子。
B.1准备材料
镊子、钝刀片、载玻片、盖玻片、10%KOH或矿物油、滴管、醋酸纤维胶带、Diff-Quik B液、吸水纸、注射器、光学显微镜、分析天平、量筒。
注：Diff-Quik B液为商品化试剂。
B.2溶液配置
使用分析天平称量10 g KOH溶于量筒量取的100 mL蒸馏水，配置10%KOH溶液。
B.3检查方法
B.3.1拔毛检查
在检查部位用镊子顺着毛发生长方向拔毛，可使用伍德氏灯辅助采集出现苹果绿色荧光的毛发，增加检出率。将毛发置于载玻片上，用滴管滴加10%KOH溶液或矿物油1~2滴，盖上盖玻片后进行光学显微镜检查。
B.3.2皮肤刮片
用钝刀片刮取病健交界处的皮肤，将皮屑置于载玻片上并滴加10%KOH或矿物油1~2滴，盖上盖玻片后进行光学显微镜检查。
B.3.3胶带粘贴
使用醋酸纤维胶带粘取病健交界处的皮肤，轻轻粘于载玻片上，用碱性染液（Diff-Quik B液）进行染色，后使用吸水纸吸去多余染液，使用光学显微镜检查。
B.3.4组织穿刺涂片检查
使用注射器对皮肤肿物或结节进行穿刺，将穿刺物制成涂片；或用钝刀片刮取病健交界处皮肤并制成涂片。染色后使用光学显微镜检查。
注：穿刺可采用负压或非负压。
B.4结果判读
镜下对样本进行观察，寻找毛发周围的或细胞学样本中的真菌菌丝或真菌孢子。观察到真菌菌丝或真菌孢子为阳性结果，否则，为阴性结果。
真菌培养及操作规范
使用真菌培养基，如DTM和SDA培养基，对疑似病例的皮肤样本进行培养。
C.1准备材料
止血钳、软毛刷、醋酸纤维胶带、DTM培养基、SDA培养基、镊子、酒精灯、乳酸酚棉蓝染色液、 蒸馏水、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、光学显微镜。
C.2培养基的配置
称量商品化的皮肤癣菌鉴别培养基（DTM）和沙氏葡萄糖琼脂（SDA）培养基粉末，按说明书溶于蒸馏水中，高压灭菌后制成固体培养基备用。
C.3环境要求
根据中华人民共和国卫生部颁布的《人间传染的病原微生物名录》，皮肤癣菌类真菌属于危害程度第二类的病原，样本检测应在二级生物安全实验室进行。
C.4操作方法
C.4.1样本采集与接种
C.4.1.1刷毛
使用软毛刷对患猫进行全身刷毛。刷20下、刷2 min～3 min或一直刷直到刷毛上沾满毛发，则可结束采样。将软毛刷轻按压于DTM和SDA培养基，直至刷毛轻微插入培养基，拿开毛刷完成样本接种。
C.4.1.2拔毛
使用止血钳从病健交界处拔取可疑毛发和结痂，可使用伍德氏灯辅助采集出现苹果绿色荧光的毛发，增加检出率。将病料轻轻按压接种于SDA和DTM真菌培养基表面。
C.4.1.3胶带粘贴
用一个4 cm长的醋酸纤维胶带压贴在病健交界处，采集可疑毛发和结痂，然后将其压于DTM和SDA培养基表面。
C.4.2培养
将接种好的平板倒置于27 °C恒温箱需氧培养，湿度保持在30%以上，SDA培养基培养14 d～21 d甚至更长时间，DTM培养基培养14 d（14 d后不做判读），期间每天观察真菌菌落的生长情况。
C.5结果判读
观察SDA和DTM培养基生长的真菌菌落形态，使用醋酸纤维胶带粘取培养出的真菌菌落，进行乳酸酚棉蓝染色，镜检观察真菌菌丝与孢子的形态，对真菌的种属进行初步鉴定。如犬小孢子菌，在DTM培养基上生长速度较快，DTM培养基变为红色；在SDA培养基上生长速度较慢，初为白色至黄色绒毛样生长，两周后菌丝较多。菌落表面呈白色至淡黄色，背面呈淡黄色。镜下菌丝透明、分隔，可见有6个或6个以上分隔的大分生孢子。观察到皮肤癣菌生长为阳性结果，否则，为阴性结果。
活组织检查
采集皮肤活组织样本进行组织病理学检查，并结合PAS染色结果进行诊断。
D.1原理
高碘酸能使细胞内多糖物质乙二醇基氧化，形成二醛基，醛基与希夫试剂中的品红结合形成紫红色化合物，可使真菌孢子和菌丝的细胞壁结构染成红色。
D.2材料准备
商品化的PAS染色液试剂盒、蒸馏水、光学显微镜。
D.3方法
实际操作方法按照试剂盒说明书进行。PAS染色操作方法如下：
a) 干燥涂片，滴加固定液（甲醛）固定30 s～60 s，蒸馏水洗净，晾干。
b) 滴加高碘酸溶液室温作用5 min～10 min，蒸馏水洗净，晾干。
c) 滴加希夫试剂（品红）室温作用10 min～15 min，蒸馏水洗净，晾干。
d) 甲基绿复染2 min～5 min，蒸馏水洗净，晾干，镜检。
D.4结果判读
涂片中真菌着红色，组织中的细胞核着绿色。若观察到红色着染的真菌结构则为阳性结果，否则，为阴性结果。
诊断结果判定
疑似病例：具备一个或多个临床表现，或伍德氏灯检查、皮肤检查任意一项为阳性。
确诊病例：具备疑似病例且真菌培养或活组织检查任意一项为阳性。
以上技术规范原文件，有兴趣的朋友可以留言共享。