⭐与内源性CoIP的关键区别:外源性CoIP通常需要对目标蛋白进行标签(如Flag, HA, Myc, GFP等)或特定表位的标记,并使用相应的商业化高亲和力标签抗体进行沉淀。这大大提高了沉淀的特异性和成功率,尤其适用于没有优质特异性抗体内源性蛋白或验证酵母双杂交等筛选结果。
⭐详细步骤在图二,这里讲一下经常刷到的问题-“为什么做外源性coip时转染效率很难达到一致”,在转染的时候要保持每组的总DNA量一致,两个阴性对照组也要转另一个标签的空载体!
⭐做co-IP很大的一个问题是会有轻重链干扰,内源性coip可以使用避免轻重链的二抗来解决,外源性coip实验我个人比较推荐用偶联标签纳米抗体磁珠,纳米抗体不会有轻重链的问题出现,我做外源性co-IP实验用的是辉骏生物的anti-Flag纳米抗体磁珠,真的很好用,大家可以搞来试试






