最近两个月都在做线粒体相关实验，对于线粒体提取也是轻松拿捏了🤏🏻试剂盒我用的是invent的，虽然不便宜但是步骤更简单些而且提出来的纯度也比较高，关于线粒体提取的小tips在图二；还有就是用于线粒体分离提取实验一定要用新鲜活细胞，线粒体是有膜结构的细胞器，水冷冻时结冰，会胀破细胞。 如果样本用于WB实验，可通过WB检测线粒体蛋白和胞浆内参蛋白来判定分离效果；线粒体蛋白有VDAC1、COX IV和DLAT等；胞浆蛋白有GAPDH、Tubulin和β-actin等；我用的是VDAC1和β-Tubulin，效果很好👌🏻 👉🏻当蛋白分子量比较接近怎么办？ 1.平常样品→跑平行胶：之前大多数时候遇到这种情况我一般跑平行胶 2.珍贵样品→剥离再孵育：这次我跑的几个蛋白分子量都比较接近，提线粒体又比较费劲，所以选择洗脱再孵育，我用的是亲和生命的膜再生液，真的很好用，内参都可以剥离👍🏻使用效果见图3，搭配他们家的快速封闭液一起用，封闭十分钟就可以继续敷下一个一抗了，封闭得很干净😊 个人不是很推荐很火的微波炉剥离法，之前试过一次，膜煮了会弯😤