从硕士到现在构的稳定株也很多了，之前构个稳定株得一两个月，现在从慢病毒包装到稳定株验证大概只要两周，包成功的[暗中观察R]下面分享一下我最成熟的一套流程～ 质粒构建：质粒成功构建是第一步，构质粒我一般交给公司，这个一定要找一家靠谱的公司，之前遇到过构的质粒根本表达不出来，这两年我都在硅基生物构的质粒，敲低和过表达都很ok，最近有活动又构了几个 慢病毒包装与浓缩：详细步骤在图3，这里说一下为啥要浓缩，其实粗病毒液也是可以转细胞的，只是转进去的阳性率可能不高，要筛很久，浓缩之后可以提高感染阳性率，我现在感染病毒之后几乎不需要用药再筛选了，节省很多时间 慢病毒包装与浓缩的实验过程大概要5-6天，在这个时间可以先把目的细胞的药筛浓度确定好，具体操作看图4～ 有些细胞感染病毒后状态会变差，不要着急加药筛选，等细胞状态稳定后再加；感染病毒我一般用12孔板，加病毒液48h后如果质粒带荧光标签可以直接用荧光显微镜看阳性率，在12孔板长满后大部分转移至中号培养瓶，小部分铺6孔板（收蛋白跑wb），这个时候就用加药的培养基培养了，阴性细胞会噶掉，剩下的都是阳性细胞，所以感染阳性率越高留下的细胞越多～ 大家有其他问题可以🍎区交流，我会一一解答[喝奶茶R]