在液相色谱（HPLC）分析中，色谱柱是分离复杂样品的“核心分离器”，其性能直接决定检测结果的准确性。然而，很多从业者（尤其是新手）在更换色谱柱时因操作失误导致压力骤增、保留时间漂移甚至色谱柱报废。本文结合100+次实际操作案例，用“傻瓜式”步骤拆解更换流程，并总结3个行业内公认的“死亡操作”，帮你避坑省钱。
关闭仪器电源，按“Purge（冲洗）”键排空管路残留流动相，依次打开系统所有排液阀。
关闭输液泵，旋转柱温箱出口手阀至半关闭状态（留1mL/min流速缓冲），系统压力需降至5 bar以下（安全阀会自动泄压）。
2. 色谱柱连接方式判断常规配置：从“左→右”依次取下色谱柱两侧管路（出口端优先卸），用扳手拧松卡套螺母时顺时针为紧（新手易反力拧松，请先用防滑手套固定卡套）。
注意：部分仪器（如 Waters e2695）采用按压式接头，需先按下蓝色卡环再旋转管路，避免金属接头划伤密封圈。
3. 旧柱移除与管路清洁用镊子夹取无绒纱布蘸甲醇，擦拭卡套内外螺纹（去除残留颗粒），新色谱柱需在甲醇中超声10min（纯水系检测需先测柱效，再冲洗平衡）。
4. 新柱安装与管路排气严禁“干装”：新柱两端接头必须用流动相充分浸润密封圈（用注射器注入5mL甲醇），确保管路与接头无气泡。
按“进样口→色谱柱→检测器”顺序连接，卡套螺母拧至“手感稍紧但不打滑”（过紧易断裂，过松会漏液）。
5. 流动相切换与平衡若原流动相为中性体系，直接切换至新流动相；若为酸性/碱性体系，需用10倍柱体积过渡（如乙腈→甲醇→水），流速设为0.5mL/min（新手可先低速平衡20min）。
关键：开启“系统平衡”提示，当基线噪音＜10μV且保留时间偏差＜2%时，方可进样！
6. 压力与柱效检测开启泵至1.0mL/min流速，观察压力曲线：
✅ 正常：10-15 min内压力稳定在厂家推荐值±10%（例：C18柱压力≤150 bar）。
❌ 异常：若压力＞200 bar且10min不下降→立即停流，检查是否柱芯堵塞（如缓冲液盐析出）。
7. 操作后验证连续进样3针标准品（如苯系物混合样），对比保留时间RSD≤0.5%，且峰形对称因子在0.95-1.05之间，确认系统恢复正常。
三、3个“绝对禁止”的死亡操作（血泪教训）❌ 1. 不卸压强行拆柱后果：系统压力骤增可能导致泵头密封圈损坏（维修成本800+），色谱柱承受“瞬时爆破”风险（如某第三方检测机构曾因未卸压导致柱芯崩裂）。
❌ 2. 忽略“流向方向”正相柱与反相柱方向相反！错误连接会使样品提前流出（新手误将“保护柱”当分析柱用，30min后发现峰全乱）。
❌ 3. 水相体系直接换有机溶剂色谱柱残留水相→直接注入乙腈会导致柱床收缩（尤其硅胶基质柱），正确做法：先用5倍柱体积“甲醇-水=80:20”过渡。
四、换柱后常见问题（场景化FAQ）Q1：换柱后压力突然升高怎么办？A：立即关泵，用10%甲醇溶液反向冲洗色谱柱30s（若属缓冲盐残留，需用0.1%磷酸水溶液冲洗）。
Q2：新柱平衡需多久？A：HPLC常用柱（C18、C8）需1-2倍柱体积（如4.6×250mm柱需要10-15min），特殊柱（如离子交换柱）需延长至20min。
Q3：如何延长色谱柱寿命？A：① 每次实验后用5-10倍柱体积纯水冲洗（反相柱）；② 检测含强保留物质时，需用10%甲醇保护柱芯。